Hlavná // Leukémie

Čo je to krvný test DAC

Syfilis je infekčné pohlavné ochorenie spôsobené spirochetami svetlého treponému. Cesty prenosu: počas sexu, z matky na plod, transfúzie a oveľa menej často - ránami na koži, ktoré prichádzajú do styku s infekčnými léziami. V závislosti od štádia sa izoluje primárny, sekundárny, latentný a terciárny syfilis.

Priame cesty

Mikroskopia v tmavom poli

Bledý treponém nemôže rásť na kultivačnom médiu a nemožno ho vizualizovať pod svetelným mikroskopom. Pretože detekcia patogénu konvenčnou mikroskopiou nie je možná, používa sa špeciálny mikroskop s tmavým poľom, kde je patogén viditeľný ako špirála na tmavom pozadí..

Pri mikroskopii sa biomateriál odoberá z lézie, ktorá je podozrivá z choroby. Mikroskopia v tmavom poli je možným spôsobom vyhodnotenia kožných lézií, ako je napríklad Chancre primárneho syfilisu alebo condyloma sekundárneho syfilisu. Ak je materiál makulopapulárneho ohniska suchý, skontrolujte aspirát lymfatických uzlín.

Negatívny výsledok nevylučuje patologický proces, štatisticky je identifikácia patogénu možná iba v 80%.

Diagnostika PCR

Reakcia zameraná na viacnásobné zvýšenie DNA svetlého treponému nám umožňuje dospieť k záveru, že infekcia syfilisom alebo jeho neprítomnosť.

Biomateriál pre analýzu môže byť akýkoľvek: krv, obsah syfilidu, mozgomiešna tekutina atď. Test je vhodný na inkubačné obdobie..

PCR je úplne špecifická.

Nepriame sérologické testy na syfilis: treponemálne a nerereponemálne testy

Sérologické testy (DAC alebo komplex sérologických reakcií) sa považujú za najbežnejší spôsob diagnostikovania všetkých štádií syfilisu. Rozlišujú sa tieto reakcie:

• aglutinácia;
• zrážanie;
• imunofluorescenčné;
• enzýmový imunotest.

Sérologické testy na syfilis sa tiež delia na treponemálne a nontreponemálne.

Nontreponemal

Ak existuje podozrenie na získaný syfilis, vykonáva sa skríningové testovanie, pri ktorom sa používajú netreponemálne testy, ktoré určujú protilátky proti lipoidným antigénom hostiteľského alebo patogénneho tkaniva pri rôznych modifikáciách. V Ruskej federácii sa rutinne vykonáva mikroprecipitačná reakcia (RMP), ktorá umožňuje detekciu protilátok proti krvným bunkám poškodeným patogénom. Spoľahlivosť skríningu je vysoká, ale špecificita je nízka, takže testovanie je vhodné na počiatočné hromadné skríning na preventívne účely.

Citlivosť rýchlych testov sa odhaduje na 78 - 86% na detekciu primárneho syfilis, 100% na sekundárny syfilis a 95 - 98% na detekciu terciárneho syfilisu..

Špecifickosť - od 85-99%, niekedy menej, ktorá sa vyskytuje v nasledujúcich podmienkach:

• tehotenstva;
• menštruácie;
• onkológia;
• choroby spojivového tkaniva;
• tuberkulóza;
• malárie;
• vírusové ochorenia;
• ochorenie pečene
• očkovanie;
• „Čerstvé“ IM;
• týfus atď..

Prebytočný tuk v potrave, pitie alkoholu a užívanie niektorých liekov môžu navyše viesť k falošne pozitívnym záverom..

Výsledky skríningových testov sa stanú pozitívnymi 1 - 2 týždne po vytvorení kanálikov. Nontreponemálne testy dávajú negatívnu odpoveď nejaký čas po liečbe. So stavom HIV môžu byť nete treponemálne protilátky detegované na dlhú dobu, niekedy počas života (čo potvrdzujú výsledky vhodnej randomizovanej štúdie)..

Iné odrody nontreponemálnych testov: VDRL, plazagínový test (RPR), test s toluidínovou červenou, väzba komplementu s kardiolipínovým antigénom (RSCc).

Wassermanova reakcia (RW)

Viazanie doplnku je odpoveď imunitného systému na infekciu, výsledok sa líši od negatívneho (kladený „-“) po výrazne pozitívny „++++“ alebo 4 plusy.

V počiatočnej fáze primárneho syfilisu je RW negatívna.

treponemálními

Kvôli možnosti falošne pozitívnych výsledkov sa treponemálne testy používajú na potvrdenie akéhokoľvek pozitívneho alebo pochybného výsledku nontreponemálnej analýzy:

• imunofluorescenčná reakcia (RIF);
• hemaglutinácia (RPHA),
• enzýmový imunotest (ELISA) pre imunoglobulíny triedy G (IgG) a imunoglobulín M (IgM);
• imunoblotu;
• RIBT / RIT (imobilizačná reakcia svetlých treponémov).

Treponemálne testy sa nepoužívajú na vyhodnotenie účinnosti liečby.

RIF na stanovenie treponemálnych protilátok triedy IgG sa používa po pozitívnom výsledku rýchlych analýz (citlivosť 84% na primárny syfilis a 100% v ostatných štádiách, špecificita 96%). Na diagnostiku vrodeného syfilisu u novorodencov sa nevzťahuje.

Niektoré laboratóriá používajú reverzné skríningové testy..

CDC (Centra pre kontrolu a prevenciu chorôb, USA) odporúča tradičné štúdie, overené kvantitatívnymi nel Treponemálnymi testami, s pozitívnym výsledkom, liečba sa vykonáva.

Imunofluorescenčná reakcia (RIF)

Sérum s fluórchrómom značenými protilátkami špecifickými pre bledý treponémový antigén sa aplikuje na zozbieraný materiál, patogén priťahuje imunitné komplexy k sebe, a preto začína žiariť luminiscenčným mikroskopom.

Pasívna hemaglutinačná reakcia alebo RPHA

Najmenej 4 týždne musia uplynúť pred objavením sa hemaglutinácie (lepenia) červených krviniek od okamihu zavedenia svetlého treponému..

Pripravené červené krvinky s fixovanými proteínovými frakciami patogénu interagujú s plazmou, ak existujú protilátky na syfilis, dochádza k reakcii.

Vhodný na potvrdenie akéhokoľvek štádia choroby..

Prepojený imunosorbentový test

Základom je reakcia antigén-protilátka. Identifikujú sa protilátky rôznych tried, ktoré je možné kvantifikovať..

Získané výsledky nám umožňujú posúdiť trvanie patologického procesu, úspešnosť liečby, imunologický stav, aktivitu patogénov..

Imunoblotting - typ ELISA, sa používa na hĺbkovú diagnostiku všetkých pochybných výsledkov.

Citlivosť a špecificita sa blíži k 100%, dnes je to ultracitlivá metóda na identifikáciu proteínov.

Metóda je založená na reakcii antigén-protilátka. Bledý treponém kultivovaný v králikových semenníkoch slúži ako antigén. Pri interakcii s protilátkami infikovanej osoby stratia patogény svoju mobilitu. Reakcia sa hodnotí pomocou mikroskopie v tmavom poli..

RIBT sa v súčasnosti používajú menej často kvôli zložitosti, ale analýza môže byť užitočná na vyriešenie sporných otázok (falošné pozitívne reakcie na syfilis)..

Odlišná diagnóza

Najväčším problémom je diagnostika terciárneho syfilisu, ktorý je spôsobený symptómami kardiovaskulárneho a nervového systému, ako aj prejavmi z kože..

Uvádzame zoznam chorôb, pri ktorých sa vykonáva diferenciálna diagnostika pre syfilis:

Kde začína diagnóza syfilisu

Spočiatku sa vedie rozhovor s pacientom, počas ktorého sú podrobnosti objasnené: kedy došlo k podozrivému sexuálnemu kontaktu a aké sú sťažnosti.

Po odobratí anamnézy prechádzajú fyzikálnym vyšetrením, osobitná pozornosť je venovaná oblasti pohlavných orgánov, konečníku, slizniciam a lymfatickým uzlinám. Už je možné vykonať predbežnú diagnostiku. Konečné overenie sa vykonáva pomocou laboratórnych testov..

Ak povieme len niečo zložité, niektoré testy odhalia pôvodcu syfilis, zatiaľ čo iné odrážajú reakciu tela na zavedenie svetlého treponému..

Na stanovenie definitívnej diagnózy RPHA sa doplní 1 treponemálnou a 1 netreponemálnou analýzou.

Diagnóza syfilisu u tehotných žien

Počas tehotenstva sa viackrát vykonáva povinný test na syfilis..

Odporúčanie na analýzu CSF sa vydáva počas prvej návštevy ženy pri konzultácii a počas tehotenstva sa vyšetruje trikrát. Pacienti z vysoko rizikovej skupiny so zaťaženou anamnézou: VTI, asociálni, závislí atď. Si vyžadujú osobitnú pozornosť.

Ak sú výsledky analýzy pozitívne, vykonajte hlbšiu diagnostiku a podľa indícií je predpísaná liečba, ktorá závisí od štádia a klinických prejavov..

Diagnóza vrodeného syfilisu

Väčšina detí s vrodeným syfilisom sa rodí neliečeným matkám alebo ktorým bola terapia podaná neskoro..

Novorodenecké sérové ​​treponemálne testy sa neodporúčajú kvôli pasívnemu prenosu protilátok IgG. Všetky deti narodené matkám so syfilisom by sa mali vyšetriť pomocou kvantitatívneho treponemálneho sérologického testu (RPR alebo VDRL) vykonaného s použitím krvného séra novorodenca..

Ako interpretovať výsledky sérologických štúdií

Reakcia mikroprecipitácie, RIF a RPHA sú negatívne - normálne, pozitívne - potvrdenie syfilisu.

Mikroprecipitačná reakcia je negatívna, ostatné sú pozitívne - anamnéza syfilisu po špecifickej liečbe alebo v neskorom štádiu.

Negatívny RIF s pozitívnymi reakciami RPHA a mikroprecipitácie - výsledok je pochybný, opakované komplexné hodnotenie.

Negatívny výsledok RIF a mikroprecipitácie, ale pozitívny RPHA je stav po úspešnej antibiotickej liečbe alebo falošne pozitívny.

Pozitívny RIF s negatívnymi RPHA a mikroprecipitačnými reakciami - skoré štádium, liečba alebo nespoľahlivý výsledok.

Pozitívna mikroprecipitačná reakcia, nepotvrdená ani RPHA, ani RIF - neprítomnosť syfilisu.

Prístrojový výskum syfilis

Inštrumentálna diagnostika sa vykonáva v závislosti od zapojenia orgánov. Napríklad pri granulomatóznom poškodení pečene je možné počítať s počítačovou tomografiou brušnej dutiny.

Röntgen hrudníka u pacientov s terciárnym syfilisom môže vykazovať dilatáciu aorty. Lineárna kalcifikácia pozdĺž aorty naznačuje syfilitickú aortitídu.

Angiografia môže byť užitočná pri diagnóze abdominálnej syfilitickej aneuryzmy..

Pri diagnostike neurosyfilu so zodpovedajúcimi príznakmi sa používa lumbálna punkcia s príjmom mozgomiechového moku..

Misha Victoria, urológ, lekársky pozorovateľ

19 421 zobrazení celkom, dnes 8 zobrazení

Čo je to krvný test DAC

Treponemálne testy na syfilis. všeobecný popis.

Všeobecné charakteristiky treponemálnych testov

Treponemálne testy na syfilis. Druhy sérologických reakcií.

RSCT - Reakcia viazania komplementu s treponemálnym antigénom (Wassermanova reakcia)

1. Všeobecný opis

2. Princíp testu

3. Formulácia Wassermannovej reakcie s treponemálnym a kardiolipínovým antigénom

4. Analýza ziskovosti

5. Špecifickosť a citlivosť

6. V ktorých štádiách choroby je lepšie používať

7. Falošné pozitívne a falošné negatívne výsledky

8. Modifikácia Wassermannovej reakcie

9. Rozsah pôsobnosti

Komplex klasických sérologických reakcií (DAC)

Výhody DAC:

Nevýhody DAC:

1. História metódy RIBT

2. Princíp metódy RIBT

3. Nastavenie testu RIBT

4. Zaznamenávanie výsledkov RIBT

5. V ktorých obdobiach choroby je lepšie používať

8. Zdroje a príčiny chýb vo formulácii, falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky

9. Zmeny reakcie imobilizácie svetlých treponémov

10. Vlastnosti, výhody a nevýhody RIBT

RIF (imunofluorescenčná reakcia)

1. História metódy

2. Princíp metódy

4. Analýza ziskovosti

5. V ktorých obdobiach choroby je lepšie používať

7. Rozsah metódy

8. Zdroje a príčiny chýb vo formulácii, falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky

9. Vlastnosti, výhody a nevýhody

10. Úpravy metódy

RPHA reakcia pasívnej hemaglutinácie

1. História metódy RPGA

2. Princíp metódy RPGA

4. Zohľadnenie výsledkov pasívnej hemaglutinačnej reakcie

5. V akých obdobiach choroby je lepšie používať RPHA

6. Citlivosť a špecifickosť RPHA

7. Rozsah metódy RPGA

8. Vlastnosti, výhody a nevýhody RPGA

10. Úpravy metódy RPGA

IFA - Enzymaticky viazaný imunosorbentový test

1. História testu ELISA

2. Zásada metódy ELISA

3. Metóda vykonávania výskumu

4. Analýza ziskovosti

5. V ktorých obdobiach choroby je lepšie používať

6. Citlivosť a špecifickosť

7. Rozsah metódy

8. Zdroje a príčiny chýb vo formulácii, falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky

9. Vlastnosti, výhody a nevýhody

10. Úpravy metódy

IHA (imunochemiluminiscenčná analýza), IHL (imunochemiluminiscencia)

Imunoblotting (Western Blot)

1. História metódy

2. Klasický imunoblot

3. Imunoblot v lineárnom imunologickom teste

4. Analýza ziskovosti

5. V ktorých obdobiach choroby je lepšie používať

6. Citlivosť a špecifickosť

7. Rozsah metódy

8. Zdroje a príčiny chýb vo formulácii, falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky

9. Vlastnosti, výhody a nevýhody

10. Úpravy metódy

xMAP technológia

Diagnóza syfilis je založená na klinických a laboratórnych údajoch. Spomedzi nich sú sérologické štúdie mimoriadne cenné, ktoré sa vykonávajú nielen na potvrdenie diagnózy syfilis, ale aj na sledovanie jeho dynamiky pod vplyvom prebiehajúcej liečby..

Serológia syfilis je dnes samostatnou oblasťou poznania. Boli vytvorené rôzne reakcie, ktoré získali štátne uznanie v rôznych krajinách. Je dôležité, aby boli výsledky správne interpretované, čo sa dá dosiahnuť len so znalosťami základov sérologie.

U nás sa sérologická diagnóza syfilis v súlade s pokynmi ministerstva zdravotníctva uplatňuje:

- zrážacia mikroreakcia (MR) pomocou skríningového testu na kardiolipínový antigén počas vyšetrenia na syfilis;

- Reagenčný plazmatický test (RPR) sa používa aj ako skríningový test, aj keď nie je treponemálny;

- komplex sérologických reakcií (DAC), ktorý zahŕňa reakciu viazania komplementu (DSC) s treponemálnymi a kardiolipínovými antigénmi a MR;

- reakcia imobilizácie svetlých treponémov (RIBT), pri ktorých sa ako antigén používajú patogénne svetlé stromčeky kmeňa Nichols;

- imunofluorescenčná reakcia (RIF) (v modifikáciách: RIF-abs, RIF-c a RIF s kapilárnou krvou z prsta); patogénny svetlý treponém kmeňa Nichols sa používa ako antigén v RIF;

- reakcia pasívnej hemaglutinácie (RPHA) s antigénom z kultivovaných alebo patogénnych svetlých treponémov;

Enzymaticky viazaný imunosorbentový test (ELISA) s antigénom z kultivovaného alebo patogénneho svetlého treponému.

Všetky tieto reakcie majú rôznu citlivosť a špecifickosť a odporúča sa ich použitie v závislosti od úlohy.

Pri hromadnom profylaktickom vyšetrení populácie syfilis sa používa MR s krvnou plazmou alebo inaktivovaným krvným sérom subjektov. Vyhodnocujú sa výsledky reakcie.-

kvalitatívne ako 4+, 3+, 2+ a negatívne. Výhodou expresnej metódy je rýchlosť odpovede (po 30 - 40 minútach), malé množstvo krvi potrebné na analýzu (2 - 3 kvapky), ktoré je možné odobrať pacientovi z prsta.

Pomocou tejto expresnej metódy sa vyšetrujú ľudia, ktorí sú podrobení pravidelným lekárskym vyšetreniam na sexuálne prenosné choroby, pacienti so somatickými nemocnicami a osoby umiestnené v špeciálnych zariadeniach pre zaistenie. Ak sa expresná metóda používa izolovane, jedná sa iba o skríningový test. Na základe pozitívneho výsledku sa syfilis nediagnostikuje a subjekty sa odporučia dermatovenerológovi na ďalšie klinické vyšetrenie a vyšetrenie svojej krvi pomocou ktoréhokoľvek z ďalších diagnostických testov (CSF, RIBT, RPGA, ELISA alebo RIF). Expresná metóda sa nepoužíva u tehotných žien, darcov, pretože často dáva falošne pozitívne výsledky. Špecializovaní záchranári odoberajú krv z prsta a vykonávajú MR. Laboratórni lekári musia zohľadniť svoje výsledky.

CSC s treponemálnymi a kardiolipínovými antigénmi sa používajú na potvrdenie diagnózy syfilis v prítomnosti aktívnych prejavov choroby, na vyšetrenie ľudí, ktorí mali sexuálny kontakt s pacientom so syfilisom, na identifikáciu latentného (latentného) syfilu, účinnosti liečby, pri vyšetrovaní pacientov v psychiatrických a neurologických nemocniciach, darcoch a tehotné ženy vrátane žien odoslaných na umelé ukončenie tehotenstva.

Krv na vyšetrenie sa odoberie v množstve 5 až 7 ml z ulnárnej žily sterilnou ihlou, podľa aseptických pravidiel. U dojčiat môže byť krv získaná z časovej žily alebo z rezov na päte. Krv sa prísne odoberá na lačný žalúdok (5 až 6 hodín po jedle) a necháva sa v čistých suchých skúmavkách 2 až 3 hodiny pri teplote miestnosti na zrážanie. DAC a špecifické reakcie sa vykonávajú v sérologických laboratóriách kožných a venereologických inštitúcií a vo vidieckych oblastiach - v laboratóriách vidieckych okresných nemocníc..

Pre zasielanie krvi na výskum do vzdialených laboratórií je metóda suchých kvapiek veľmi výhodná. Na tento účel sa nasledujúci deň po odbere krvi sérum oddelí od zrazeniny. Pomocou odmernej pipety pridajte 1 ml séra a nalejte ho vo forme dvoch samostatných kruhov na pásik hrubého papiera (voskovaný alebo celofánový) s rozmermi približne 6 × 8 cm. Na voľný okraj papiera sa uvádza meno pacienta, meno a priezvisko, dátum odberu krvi a sériové číslo. Zostáva sérum na papieri, chránené pred priamym slnečným žiarením a prachom

počas 24 hodín pri izbovej teplote na sušenie. Potom sa prúžky papiera so sušenou srvátkou stočia a odošlú do laboratória.

DSC v RBC s kardiolipínovým antigénom nie je príliš citlivý a stáva sa pozitívnym 2-4 týždne po objavení sa tuhého chancre a titer reakčných látok sa postupne zvyšuje a dosahuje maximum (1: 160-1: 320 a vyššie) so sekundárnym čerstvým syfilisom. Potom titer reagínov postupne klesá a pri sekundárnom recidivujúcom syfili obvykle nepresahuje 1: 80-1: 20. U pacientov s terciárnym syfilisom majú tieto reakcie pozitívny výsledok iba v 70% prípadov.

Malo by sa zdôrazniť, že DAC nie je striktne špecifický pre syfilis a v niektorých prípadoch môže poskytnúť falošne pozitívne (nešpecifické) výsledky. Takéto falošne pozitívne reakcie sa pozorujú u pacientov s leprou, maláriou, niekedy s autoimunitným ochorením, novotvarmi, pneumóniou, tuberkulózou, ochoreniami pečene, keď užívate lieky (sulfonamidy, glukozidy, valeriány atď.), Ako aj počas tehotenstva, počas menštruácie, atď. d. Pri odbere krvi na výskum DAC je potrebné pacienta upozorniť, aby nepil alkohol, mastné potraviny ani neužíval lieky 2-3 dni skôr. Krv sa neodporúča vyšetrovať počas 1. týždňa po očkovaní, zraneniach, chirurgických zákrokoch, v prípade horúčky, počas prvých 2 týždňov po pôrode, u novorodencov počas prvých 10 dní života, pretože fyzikálno-chemické zmeny krvného séra za týchto podmienok môžu spôsobiť byť podobné tým, ktoré sa pozorovali u pacientov so syfilisom.

Falošne pozitívne výsledky možno získať aj kvôli technickým chybám (neúplná hemolýza, nesterilný odber krvi, nedostatočná kvalifikácia laboratórnych asistentov).

Na rozlíšenie falošne pozitívnych výsledkov DAC od skutočných, na diagnostiku latentných a neskorých foriem syfilis s podozrením na syfilitickú infekciu na stanovenie retrospektívnej diagnózy choroby sa odporúča použiť špecifické sérologické reakcie (RIBT, RPHA, ELISA alebo RIF).

Pri špecifických sérologických reakciách sa z ulnárnej žily na lačný žalúdok odoberie aj krv v množstve 5 až 10 ml. Krv sa naleje do suchej skúmavky na testovanie na RIF a do sterilnej skúmavky na testovanie na RIBT. Formulácia špecifických sérologických reakcií na syfilis sa vykonáva v špecializovaných laboratóriách kožných a venereologických inštitúcií.

RIF je založený na nepriamom spôsobe stanovenia fluorescenčných protilátok. Antigénom v tejto reakcii je suspenzia usmrteného kultúrneho svetlého treponému upevnená na sklenených podložných sklíčkach, na ktoré sa aplikujú testovacie a antidruhové fluorescenčné séra. Výsledky RIF sa stanovia pod luminiscenčným mikroskopom vyhodnotením žiara treponému v prípravku. S pozitívnym výsledkom majú treponémy žltkasto-zelenú žiaru, ktorej stupeň je označený kladmi od 1 do 4; s negatívnymi výsledkami treponém nesvieti.

Ďalšia špecifická reakcia na syfilis - RIBT - je založená na fenoméne imobilizácie svetlých treponémov s krvnými antigénmi pacienta v krvi v prítomnosti komplementu. Ako antigén pre RIBT sa používa suspenzia živých svetlých treponémov získaných z králikov infikovaných syfilisom. Počítanie stratených pohyblivých (imobilizovaných) treponémov sa uskutočňuje pod mikroskopom. Výsledky reakcie sa hodnotia v percentách: od 0 do 20% - negatívne, od 21 do 30% - pochybné, od 31 do 50% - mierne pozitívne, od 51 do 100% - pozitívne. RIBT sa stáva pozitívnym na konci primárneho obdobia syfilisu a zostáva tak počas všetkých období tohto ochorenia a niekedy aj po úplnej anti-syfilizačnej liečbe. Pri terciárnom syfili, špecifických léziách vnútorných orgánov, nervovom systéme a vrodenom syfilise, keď je CSF často negatívny, dáva RIBT pozitívne výsledky v 98 - 100% prípadov. Diagnóza latentného syfilisu sa musí nevyhnutne potvrdiť pozitívnym RIBT.

RIBT môže tiež poskytnúť falošne pozitívne výsledky, ak testovacie sérum obsahuje treponemocidné látky (antibiotiká - penicilín, tetracyklín), ktoré spôsobujú nešpecifickú (toxickú) imobilizáciu svetlých treponémov. Preto nemôžete testovať krv na túto reakciu skôr ako 2 týždne po ukončení užívania antibiotík.

Sérologické štúdie sa môžu použiť na určenie porážky syfilis nervového systému a na vyšetrenie cerebrospinálnej (cerebrospinálnej) tekutiny pacienta. Skúma sa tiež prítomnosť bielkovín, enzýmových prvkov, ktoré indikujú patológiu a pomáhajú diagnostikovať jednu alebo druhú formu neurosyfilu. Mozgová miecha sa získava bedrovou punkciou. Vykonané asepticky, nepredstavuje žiadne nebezpečenstvo a môže byť vykonané lekárom aj v ambulancii. Sérologické štúdie mozgomiechového moku sú indikované vo všetkých prípadoch syfilisu.

Mikroskopické vyšetrenie

V prípade primárneho syfilisu sa na bledom treponéme vyšetrí odnímateľný pevný kanálik alebo punkcia lymfatických uzlín. V prípade sekundárneho syfilisu sa materiál odoberá z povrchu erodovaných papúl na koži, slizniciach, z trhlín atď. Predtým, ako sa materiál vezme na čistenie rôznych kontaminantov, musí byť povrch ohnísk (erózia, vredy, praskliny) dôkladne utretý sterilným tampónom z bavlny, ktorý je navlhčený izotonickým roztokom. chlorid sodný alebo predpíšte krémy s rovnakým roztokom.
hľadaný povrch sa suší suchým tampónom a platinovou slučkou alebo špachtľou mierne dráždi periférne oblasti, zatiaľ čo prstom jemne stlačte gumovú rukavicu, kým sa neobjaví tkanivová tekutina (sérum), z ktorej je prípravok pripravený na výskum. Získanie tkanivovej tekutiny je dôležité pre diagnózu syfilis, pretože svetlé treponémy sa nachádzajú v lúmenoch lymfatických kapilár, v tkanivových medzerách okolo lymfatických a krvných ciev..

Punkcia regionálnych lymfatických uzlín

Koža na lymfatických uzlinách je ošetrená 96% alkoholom a 3 až 5% alkoholovým roztokom jódu. Potom lymfatický uzol fixuje 1 a 2 prsty ľavej ruky. Pravou rukou vezmú sterilnú injekčnú striekačku s niekoľkými kvapkami izotonického roztoku chloridu sodného, ​​ktorá sa vstrekne rovnobežne s pozdĺžnou osou lymfatickej uzliny. Ihla je tlačená v rôznych smeroch k protiľahlej stene uzla kapsuly a obsah injekčnej striekačky sa pomaly vkladá. Prstami ľavej ruky sa lymfatická uzlina mierne masíruje. Pri pomalom odstraňovaní ihly sa piest striekačky súčasne vytiahne a nasáva obsah lymfatickej uzliny. Materiál sa nanesie na sklenené podložné sklíčko (s malým množstvom materiálu sa pridá kvapka izotonického roztoku chloridu sodného) pokryté krycím sklíčkom. Štúdium natívneho liečiva sa uskutočňuje v tmavom zornom poli pomocou svetelného optického mikroskopu s kondenzátorom v tmavom poli (šošovka 40, 7x, 10x alebo 15x). Bledé treponémy sa tiež nachádzajú v zafarbených prípravkoch. Keď sa zafarbia podľa Romanovského-Giemsy, bledé treponémy sfarbujú ružovú farbu, podľa Fontana a Morozova hnedú (čiernu) sa podľa Burriho metódy detegujú nenatierané treponémy na tmavom pozadí..

Sérologická diagnóza

Pri diagnostike syfilis, pri hodnotení účinnosti liečby, stanovovaní kritéria liečby, pri identifikácii latentných a rezistentných foriem, sú dôležité štandardné (klasické) a špecifické sérologické reakcie. Štandardné alebo klasické sérologické reakcie (DAC) zahŕňajú:

• Wassermannova reakcia (RV),
• sedimentárne reakcie Kan a Sachs-Vitebska (cytocholické),
• reakcia skla (expresná metóda),

konkrétne:

• bledá treponemálna imobilizačná reakcia (RIBT),
• imunofluorescenčná reakcia (RIF).

Wassermannova reakcia (RV)

- vyvinuli A. Wasserman (A. Wasserman) spolu s A. Neisserom (A. Neisser) a C. Brookom (C. Bruck) v roku 1906. Wassermannova reakcia je založená na fenoméne väzby komplementu (Borde-Zhanguova reakcia) a umožňuje stanovenie anti-lipidových protilátok (reagínov). Podľa moderných konceptov Wassermanova reakcia určuje protilátky proti lipidom makroorganizmu skôr ako bledý treponém a reakcia odhaľuje autoimunitný proces, ktorý je spôsobený denaturáciou tkanív makroorganizmu bledými treponémami s tvorbou lipoproteínového komplexu (konjugátu), v ktorom lipidy (haptény) sú determinantom..

RV sa zvyčajne dodáva s dvoma alebo tromi antigénmi. Najčastejšie sa používa kardiolipínový antigén (extrakt zo srdca býka obohatený o cholesterol a lecitín) a treponemálny antigén (ultrazvukom upravená suspenzia anatogénneho kultúrneho svetlého treponému). Spolu so sérovými činidlami krvného séra pacienta tvoria tieto antigény imunitný komplex, ktorý dokáže adsorbovať a viazať komplement. Na vizuálne stanovenie vytvoreného komplexu (reagencie + antigén + komplement) sa ako indikátor používa hemolytický systém (zmes ovčích erytrocytov s hemolytickým sérom). Ak je komplement viazaný v 1. fáze reakcie (reagencie + antigén + komplement), nedochádza k hemolýze - červené krvinky sa zrážajú na ľahko viditeľné zrazeniny (PB pozitívne). Ak komplement nie je viazaný vo fáze 1 kvôli neprítomnosti reagencií v testovanom sére, použije sa hemolytický systém a dôjde k hemolýze (RV je negatívna). Závažnosť hemolýzy vo formulácii RV sa odhaduje na základe kladov: úplná absencia hemolýzy ++++ alebo 4+ (RV je silne pozitívna); sotva začala hemolýza +++ alebo 3+ (PB pozitívna); významná hemolýza ++ alebo 2+ (PB slabo pozitívna); nezrozumiteľný hemolytický obraz ± (RV je pochybný); úplná hemolýza - (Wassermannova reakcia je negatívna).

Okrem kvalitatívneho hodnotenia PB existuje aj kvantitatívna formulácia s rôznymi riedeniami séra (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titer reagínov sa určuje maximálnym riedením, ktoré stále dáva ostro pozitívny (4+) výsledok. Kvantitatívne zloženie RV je dôležité pri diagnostike niektorých klinických foriem syfilitickej infekcie, ako aj pri monitorovaní účinnosti liečby. V súčasnosti sa Wassermanova reakcia dodáva s dvoma antigénmi (kardiolipín a treponemálny zvukový kmeň Reuters). RV sa spravidla stáva pozitívnym 5 až 6 týždňov po infekcii u 25 - 60% pacientov, o 7 - 8 týždňov - o 75 - 96%, o 9 - 19 týždňov - o 100%, hoci v posledných rokoch niekedy skôr alebo neskôr, Zároveň sa titer reakčných látok postupne zvyšuje a dosahuje maximálnu hodnotu (1: 160-1: 320 a vyššia) v prípade výskytu generalizovaných vyrážok (syfilis sekundárny čerstvý). Keď sa diagnostikujú pozitivity RV s primárnym séropozitívnym syfilisom.
Pri sekundárnej čerstvej a sekundárnej recidíve syfilis je RV pozitívna u 100% pacientov, ale u podvýživených pacientov so oslabenou imunitou je možné pozorovať negatívny výsledok. Následne titer reagínov postupne klesá a pri sekundárnom recidivujúcom syfili obvykle nepresahuje 1: 80-1: 120.
U terciárneho syfilisu je RV pozitívna u 65 - 70% pacientov a zvyčajne sa pozoruje nízky titer reakčných látok (1: 20-1: 40). V neskorých formách syfilis (syfilis vnútorných orgánov, nervový systém) je pozitívna RV pozorovaná v 50-80% prípadov. Titer reakčných činidiel sa pohybuje od 1: 5 do 1: 320.
Pri latentnom syfili je pozitívna RV pozorovaná u 100% pacientov. Titer reakčných činidiel je od 1:80 do 1: 640 a pri neskorom latentnom syfili od 1:10 do 1:20. Rýchly pokles titra činidla (až do úplnej negativity) počas liečby naznačuje účinnosť liečby.

Nevýhody Wassermannovej reakcie sú nedostatočná citlivosť (negatívna v počiatočnej fáze primárneho syfilisu). Je tiež negatívna u 1/3 pacientov, ak boli v minulosti liečení antibiotikami, u pacientov s terciárnym aktívnym syfilisom s léziami kože a slizníc, kostno-kĺbového aparátu, vnútorných orgánov, centrálneho nervového systému a neskoro kongenitálneho syfilisu..
Nedostatok špecifickosti - Wassermanova reakcia môže byť pozitívna u jedincov, ktorí predtým neboli chorí a nemajú syfilis. Falošne pozitívne (nešpecifické) výsledky RV sa pozorujú najmä u pacientov, ktorí trpia systémovým lupus erythematodes, lepry, malárie, malígnych novotvarov, lézií pečene, rozsiahleho infarktu myokardu a iných chorôb, a niekedy u úplne zdravých ľudí..
U niektorých žien sa pred pôrodom alebo po pôrode, u páchateľov drog, po anestézii a požití alkoholu zistí krátkodobá falošne pozitívna Wassermanova reakcia. Falošne pozitívny RV je spravidla slabý, často s nízkym titrom reakčných látok (1: 5-1: 20), pozitívny (3+) alebo slabo pozitívny (2+). Pri hromadných sérologických vyšetreniach je frekvencia falošne pozitívnych výsledkov 0,1 - 0,15%. Ak chcete prekonať nedostatok citlivosti, použite nastavenie v chlade (Collardova reakcia) a súčasne s ďalšími sérologickými reakciami..

Sedimentárne reakcie Caen a Sachs-Vitebska

Wassermannova reakcia sa používa v kombinácii s dvoma sedimentárnymi reakciami (Kahn a Sachs-Vitebsk), ktorých zloženie vytvára koncentrovanejšie antigény. Expresná metóda (mikroreakcia na skle) - týka sa lipidových reakcií a je založená na zrážacej reakcii. Je vložený so špecifickým kardiolipínovým antigénom, z ktorého 1 kvapka je zmiešaná s 2-3 kvapkami testovaného krvného séra v dierach špeciálnej sklenenej platne.
Výhodou je rýchlosť odozvy (za 30 - 40 minút). Výsledky sa odhadujú na základe množstva zrazeniny a veľkosti vločiek. Závažnosť je definovaná ako DAC - 4+, 3+, 2+ a negatívna. Je potrebné poznamenať, že falošne pozitívne výsledky sa pozorujú častejšie ako pri RV. Expresná metóda sa spravidla používa pri hromadných skríningoch syfilis, pri skríningu v klinických diagnostických laboratóriách, somatických oddeleniach a nemocniciach. Na základe výsledkov expresnej metódy je diagnóza syfilis zakázaná, je vylúčená pre použitie u tehotných žien, darcov, ako aj pre sledovanie po liečbe..

Imobilizácia svetlého treponému (RIBT)

Imobilizačnú reakciu svetlého treponému (RIBT) - navrhol v roku 1949 R. Nelson (R. W. Nelson) a M. Meyer (M. Mayer). Je to najšpecifickejší diagnostický test na syfilis. Jeho zložitosť a vysoké náklady na výrobu však obmedzujú jeho použitie. V krvnom sére pacientov sa vykonáva stanovenie protilátok špecifických pre video (imobilizíny), ktoré vedú k imobilite svetlých treponémov v prítomnosti komplementu. Antigén je živá patogénna svetlá treponémia vylučovaná z králikov infikovaných syfilisom. Pomocou mikroskopu sa vykoná počítanie stratených (imobilizovaných) svetlých treponémov a vyhodnotia sa výsledky RIBT: imobilizácia svetlých treponémov z 51 na 100% je pozitívna; od 31 do 50% - mierne pozitívne; od 21 do 30% - pochybné; od 0 do 20% - negatívny.
RIBT je dôležitý v diferenciálnej diagnostike na rozlíšenie falošne pozitívnych sérologických reakcií od reakcií spôsobených syfilisom. Neskoro sa stáva pozitívnym ako RV, RIF, a preto sa nepoužíva na diagnostiku infekčného syfilisu, hoci v sekundárnom období syfilisu je pozitívny u 85 - 100% pacientov..
V terciárnom období syfilis s poškodením vnútorných orgánov, pohybového aparátu, nervového systému je RIBT v 98 - 100% prípadov pozitívny (PB je často negatívny).
Je potrebné si uvedomiť, že RIBT sa môže ukázať ako falošne pozitívny, ak sú v sére prítomné treponemocidálne prípravky (penicilín, tetracyklín, makrolidy atď.), Ktoré spôsobujú nešpecifickú imobilizáciu svetlých treponémov. Z tohto dôvodu sa krv v RIBT testuje najskôr 2 týždne po ukončení užívania antibiotík a iných liekov.
RIBT a RIF počas liečby sa pomaly negujú, preto sa počas liečby nepoužíva ako kontrola.

Imunofluorescenčná reakcia (RIF)

Imunofluorescenčná reakcia (RIF) - vyvinutá v roku 1954 A.Concom a bola prvýkrát použitá na diagnostiku syfilitickej infekcie Deacon, Falcone, Harris v roku 1957. RIF je založený na nepriamom spôsobe stanovenia fluorescenčných protilátok. Antigénom na produkciu je tkanivovo patogénna svetlá treponémia fixovaná na sklenených podložných sklíčkach, na ktoré je nanesené testovacie sérum. Ak testovacie sérum obsahuje anti-treponemálne protilátky súvisiace s IgM a IgG, pevne sa viažu na treponemálny antigén, ktorý je detegovaný v luminiscenčnom mikroskope pomocou antidruhového („anti-ľudského“) fluorescenčného séra..
Výsledky RIF sa zohľadňujú podľa intenzity žiara bledých treponémov v prípravku (žlto-zelená žiara). V neprítomnosti sérových treponemálnych protilátok sa nezistia bledé treponémie. V prítomnosti protilátok je detekovaná luminiscencia svetlých treponémov, ktorých stupeň je vyjadrený v množstvách: 0 a 1+ - negatívna reakcia; od 2+ do 4+ - pozitívne.
RIF znamená skupinové treponemálne reakcie a umiestni sa do riedenia testovaného séra 10 a 200 krát (RIF-10 a RIF-200). RIF-10 sa považuje za citlivejší, nešpecifické pozitívne výsledky však často klesajú ako pri stanovení RIF-200 (vyznačuje sa vyššou špecifickosťou). RIF je spravidla pozitívny skôr ako RV - pozitívny v primárnom seronegatívnom syfili u 80% pacientov, u 100% v sekundárnom období syfilis, vždy pozitívny u latentného syfilisu a 95-100% prípadov s neskorými formami a vrodeným syfilisom.
Špecifickosť RIF sa zvyšuje po predbežnom ošetrení testovaného séra sorbent-ultrazvukovým treponemálnym antigénom, ktorý viaže skupinové protilátky (RIF - abs).
Indikácie pre formuláciu RIBT a RIF sú diagnóza latentného syfilisu na potvrdenie špecifickosti komplexu lipidových reakcií v prípade syfilitickej infekcie založenej na pozitívnej RV. Pozitívne RIBT a RIF sú dôkazom latentného syfilisu. V prípade falošne pozitívnych RV pri rôznych chorobách (systémový lupus erythematodes, zhubné nádory atď.) A ak sú opakované výsledky RIBT a RIF negatívne, naznačuje to nešpecifickú povahu RV. Podozrenie na oneskorené syfilitické lézie vnútorných orgánov, muskuloskeletálneho systému, nervového systému v prítomnosti negatívneho RV u pacientov. Podozrenie na primárny seronegatívny syfilis, keď sa u pacientov s viacnásobnými štúdiami erózie (vredov) oddelených od povrchu, s punkciou zväčšených regionálnych lymfatických uzlín, bledý treponém nezistí - v tomto prípade iba RIF - 10.
Pri skúmaní ľudí s negatívnym RV, ktorí mali dlhodobý sexuálny a domáci kontakt s pacientmi so syfilisom, vzhľadom na pravdepodobnú možnosť liečby v nedávnej minulosti pomocou antimorfologických liekov, ktoré spôsobili negatívny RV. Enzymaticky viazaný imunosorbentový test (ELISA, ELISA - enzýmový imunosorbentový test) - metóda vyvinutá E. Engvallom a kol., S. Avrames (1971). Podstata spočíva v kombinácii syfilitického antigénu adsorbovaného na povrchu nosiča v tuhej fáze s protilátkou testovaného krvného séra a identifikácie špecifického komplexu antigén-protilátka s použitím enzýmom značeného antispeciálneho imunitného séra. To umožňuje vizuálne vyhodnotiť výsledky testu ELISA podľa stupňa zmeny farby substrátu pôsobením enzýmu, ktorý je súčasťou konjugátu. K nespoľahlivým výsledkom testu ELISA môže dôjsť v dôsledku nedostatočného riedenia zložiek, narušenia teplotných a časových podmienok, nesúladu pH roztokov, kontaminácie laboratórneho skla, nesprávneho postupu umývania médií.

Pasívna hemaglutinačná reakcia (RPHA)

Navrhnutý ako diagnostický test na syphilis T. Ratath (1965,1967), T. Tomizawa (1966). Makromodifikácia reakcie sa nazýva TRNA, mikromodifikácia sa nazýva MNA-TP, automatizovaná verzia je AMNA-TR a reakcia s makrokapsulami z polymočoviny namiesto červených krviniek je MCA-TP. Citlivosť a špecifickosť RPHA sú podobné ako u RIBT, RIF, ale RPGA je v skorých formách syfilis menej citlivá v porovnaní s RIF-abs a vyššia v neskorších s vrodeným syfilisom. RPGA sa vkladá do kvalitatívnych a kvantitatívnych možností.

Technika odberu krvi na sérologické reakcie

Na výskum RV, RIF sa krv RIBT odoberá z ulnárnej žily na lačný žalúdok alebo najskôr 4 hodiny po požití sterilnou injekčnou striekačkou alebo jednou ihlou (gravitáciou). V okamihu zachytenia je koža vopred ošetrená 70% alkoholom. Injekčná striekačka a ihla sa majú prepláchnuť izotonickým roztokom chloridu sodného. 5-7 ml testovanej krvi sa naleje do čistej suchej skúmavky. Na skúmavku je nalepený slepý papier s menom, iniciálami pacienta, číslom lekárskej anamnézy alebo ambulantnej karty a dátumom odberu krvi. Po odobratí krvi sa skúmavka vloží do chladničky s teplotou + 4 ° + 8 ° C do nasledujúceho dňa. Nasledujúci deň sa sérum odvedie na výskum. Ak sa krv nepoužije nasledujúci deň, sérum sa musí vypustiť z zrazeniny a musí sa uchovávať v chladničke najviac jeden týždeň. Skúška na RIBT musí byť špeciálne pripravená a sterilná. V prípade porušenia pravidiel odberu krvi na účely výskumu, nedodržania podmienok môže dôjsť k skresleniu výsledkov.
Neodporúča sa odoberať vzorky krvi na výskum po jedle, po alkohole, rôznych liekoch, po zavedení rôznych vakcín, počas menštruačného cyklu u žien..
Pri výskume expresnej metódy je krv ošetrená z končeka prstov, ako je tomu pri odbere na ESR, ale kapiláru 1 odoberajú krv. Expresná metóda môže byť tiež stanovená s krvným sérom získaným venepunkciou. Ak je potrebné vykonať krvné testy vo vzdialených laboratóriách namiesto krvi, môžete poslať suché sérum (metóda suchých kvapiek). Na tento účel sa nasledujúci deň po odobratí krvi sérum oddelí od zrazeniny a odoberie sa do sterilnej injekčnej striekačky v množstve 1 ml. Potom sa sérum naleje vo forme dvoch samostatných kruhov na pásik hrubého písacieho papiera (voskový papier alebo celofán) s rozmermi 6 x 8 cm. Na voľný okraj papiera sa uvedie meno, iniciály subjektu a dátum odberu krvi. Sérový papier je chránený pred priamym slnečným žiarením a ponechaný pri izbovej teplote až do nasledujúceho dňa. Sérum zaschne vo forme malých kruhov lesklej nažltnutej sklovitej fólie. Potom sa prúžky papiera so sušenou srvátkou stočia ako farmaceutický prášok a odošlú do laboratória, pričom sa uvedie diagnóza a na aký účel sa skúma..

Sérologická rezistencia

U niektorých (2% alebo viac) pacientov so syfilisom, napriek plnohodnotnej anti-syfilizačnej liečbe, dochádza k spomaleniu (neprítomnosti) negatívnych sérologických reakcií po liečbe do 12 mesiacov alebo viac. Existuje takzvaná sérologická rezistencia, ktorá sa v posledných rokoch často pozoruje. Existujú formy sérologickej rezistencie:

• Pravda (absolútna, bezpodmienečná) - na zvýšenie imunitných síl tela je potrebné vykonať ďalšiu anti-syfilitickú liečbu kombinovanú s nešpecifickou terapiou.
• Relatívne - bledé treponémy tvoria po správnom ošetrení cysty alebo L-formy, ktoré sú v tele v nízko virulentnom stave, a preto ďalšia liečba nemení ukazovatele sérologických reakcií, najmä RIF a RIBT..

Zároveň dochádza k nevýznamným metabolickým procesom v cystových formách a škrupiny cysty sú cudzí proteín (antigén). Pre svoju ochranu telo vytvára špecifické protilátky, ktoré sú pozitívne alebo ostro pozitívne pri formulovaní sérologických reakcií, neprítomnosti prejavov choroby. Pri L-formách sú metabolické procesy viac redukované a antigénne vlastnosti chýbajú alebo sa mierne exprimujú. Špecifické protilátky sa nevytvárajú alebo sú v malom množstve, sérologické reakcie sú slabo pozitívne alebo negatívne. Čím dlhšie je časové obdobie od okamihu infekcie, tým väčší je počet bledých treponémov, ktoré sa transformujú na formy prežitia (cysty, spóry, L-formy, zrná), v ktorých anti-syfilitická terapia nie je účinná..

Pseudorezistencia - po liečbe, napriek pozitívnej sérologickej reakcii, v tele chýba bledý treponém. V tele sa nenachádza žiadny antigén, ale tvorba protilátok pokračuje, ktoré sú fixované počas produkcie sérologických reakcií.
Sérologická rezistencia sa môže vyvinúť v dôsledku:

• horšia liečba bez ohľadu na predpis a štádium choroby;
• nedostatočná dávka, a to najmä z dôvodu nezohľadnenia telesnej hmotnosti pacienta;
• porušenie intervalu medzi zavedením drog;
• zachovanie svetlých treponémov v tele napriek plnohodnotnému špecifickému ošetreniu v dôsledku ich rezistencie na penicilín a iné chemoterapeutické látky v prítomnosti skrytých, hmatných lézií vo vnútorných orgánoch, nervového systému, lymfatických uzlín, ktoré sú neprístupné pre antibakteriálne lieky (často sa vyskytujú svetlé treponémie) v tkanivách jazvy mnoho rokov po ukončení terapie je niekedy možné odhaliť bledé treponémy v lymfatických uzlinách 3 až 5 rokov po antisfytilickej terapii);
• zníženie ochranných síl pri rôznych chorobách a intoxikáciách (endokrinopatie, alkoholizmus, drogová závislosť atď.);
• celkové vyčerpanie (chudnutie na vitamíny, bielkoviny, tuky).

Okrem toho sa často zisťuje falošne pozitívna sérologická reakcia, ktorá nesúvisí s prítomnosťou syfilisu u pacientov a je spôsobená:

• sprievodné nešpecifické choroby vnútorných orgánov, poruchy kardiovaskulárneho systému, reumatizmus, dysfunkcie endokrinného a nervového systému, ťažké chronické dermatózy, zhubné nádory;
• lézie nervového systému (ťažké zranenia, otras mozgu, duševné zranenia);
• tehotenstvo chronická intoxikácia alkoholom, nikotínovými drogami; infekčné choroby (malária, tuberkulóza, vírusová hepatitída, úplavica, vyrážka, tyfus a recidíva).

Tieto faktory môžu ovplyvniť imunologickú reaktivitu organizmu tak počas obdobia aktívneho vývoja syfilitických prejavov, ako aj počas ich regresie..